Inicio

Expresión y caracterización de un fragmento de anticuerpo recombinante con potencialidades para ser usado en la radioinmunoterapia de tumores CEA positivo

Pérez Sánchez, Lincidio (2009) Expresión y caracterización de un fragmento de anticuerpo recombinante con potencialidades para ser usado en la radioinmunoterapia de tumores CEA positivo. Doctor en Ciencias de una Especialidad, Universidad de La Habana. Facultad de Biología.

[img]
Vista previa
PDF
Available under License Reconocimiento-No comercial-Sin obras derivadas.

2222Kb

Resumen

Las limitaciones que presentan los anticuerpos monoclonales de rat√≥n para su uso en la radioinmunoterapia han estimulado la b√ļsqueda de mol√©culas m√°s peque√Īas derivadas de los mismos, que generalmente presentan una mayor permeabilidad a los tejidos, menor tiempo de vida media en sangre y menor inmunogenicidad. Una de las m√ļltiples variantes que se estudian actualmente para lograr este prop√≥sito son los fragmentos de anticuerpos en su conformaci√≥n dim√©rica, los que por sus caracter√≠sticas pueden satisfacer las expectativas anteriores, y adem√°s mantienen la afinidad funcional del anticuerpo monoclonal original al recrear los dos sitios de uni√≥n al ant√≠geno. En el presente trabajo se describe la obtenci√≥n de un fragmento de anticuerpo dim√©rico, denominado fragmento anti-CEA M3, con el cual se pretende superar las limitaciones de biodistribuci√≥n y inmunogenicidad que presenta el anticuerpo monoclonal de rat√≥n CB/iorCEA.1 para su empleo en la radioinmunoterapia del c√°ncer. El fragmento de este anticuerpo se construy√≥ mediante la uni√≥n de las regiones variables de cadena pesada y ligera con un p√©ptido de 5 amino√°cidos. El fragmento anti-CEA M3 se expres√≥ de forma activa en el periplasma de E. coli y se purific√≥ mediante cromatograf√≠as de afinidad a iones met√°licos y de exclusi√≥n molecular, logr√°ndose establecer un proceso de producci√≥n a escala de 5 Litros de fermentaci√≥n con un rendimiento final de 3 mg/L de fragmento dim√©rico. La especificidad de este fragmento por su ant√≠geno se evalu√≥ por ELISA, inmunofluorescencia y itometr√≠a de flujo, mientras la afinidad se determin√≥ en un ELISA de competencia y en el BIAcore. El fragmento anti-CEA M3 se logr√≥ marcar con alta eficiencia a los is√≥topos radioactivos 125 I y 131 I a trav√©s del m√©todo de la cloramina T, alcanz√°ndose elevada estabilidad durante los marcajes. La mol√©cula adiomarcada mantuvo la inmunorreactividad y afinidad por el CEA similar al anticuerpo completo. Experimentos en ratones at√≠micos xenotransplantados conc√©lulas tumorales humanas LS 174T demostraron una acumulaci√≥n espec√≠fica de este fragmento en el tumor y una baja acumulaci√≥n en el resto de los tejidos. Los primeros resultados obtenidos en el marco de un ensayo cl√≠nico fase I con el fragmento anti-CEA radiomarcado con 131 I en pacientes con c√°ncer colorectal indicaron que el fragmento no produce eventos adversos y no origina inmunogenicidad 1 mes despu√©s de la administraci√≥n. Durante las im√°genes gammagr√°ficas se demostr√≥ que no se acumula inespec√≠ficamente en los √≥rganos no blancos mientras ocurre una acumulaci√≥n espec√≠fica en el tumor. Estos resultados sugieren las posibles ventajas del fragmento sobre el anticuerpo original al usarse en la radioinmunoterapia del c√°ncer.

Tipo de tesis:Tesis de doctorado (Doctor en Ciencias de una Especialidad)
Palabras clave:C√°ncer Colorectal;Radioinmunoterapia;Anticuerpo Recombinante;Tumores;Tratamiento;Cuba
Materia:Tecnología, Industria, Agricultura > Biotecnología
Compuestos Químicos y Drogas > Aminoácidos, Péptidos y Proteínas
Disciplinas de las Ciencias Naturales > Disciplinas de las Ciencias Biológicas > Biología
Técnicas Analíticas, Diagnósticas y Terapéuticas y Equipos > Terapéutica > Quimioterapia
Enfermedades > Neoplasias
Especialidad doctoral:Otras
Código ID:206
Depositado por:alina rodriguez fang
Depositado en:07 Jul 2011 16:33
Ultima modificación:12 Dic 2011 16:22

Sólo para el personal del repositorio: página de control del registro