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Obtenci贸n y caracterizaci贸n de cepas atenuadas de Vibrio cholerae O139 para identificar ingrediente farmac茅utico activo de una vacuna contra el c贸lera

Led贸n P茅rez, Talena Yamil茅 (2013) Obtenci贸n y caracterizaci贸n de cepas atenuadas de Vibrio cholerae O139 para identificar ingrediente farmac茅utico activo de una vacuna contra el c贸lera. Doctor en Ciencias de una Especialidad, Centro Nacional de Investigaciones Cient铆ficas.

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Resumen

El c贸lera causado por Vibrio cholerae de serogrupo O139 coexiste en Asia con el causado por vibriones de serogrupo O1. Aunque existen dos vacunas comerciales 60% eficaces contra el serogrupo O1, no existe ninguna con eficacia probada contra el c贸lera causado por vibriones del serogrupo O139. Se acepta que Vibrio cholerae de serogrupo O139 constituya el agente causal de la octava pandemia de c贸lera; por esta raz贸n en este trabajo se seleccion贸 el aislado cl铆nico CRC266 como progenitor para la construcci贸n de cepas atenuadas gen茅ticamente, las que pudieran constituir el ingrediente activo de una vacuna viva contra el c贸lera causado por vibriones del serogrupo O139. Al caracterizar la organizaci贸n gen茅tica de los profagos CTX蠁 en CRC266, se identific贸 que en el locus dif del cromosoma 1 de esta cepa coexisten copias de CTX蠁 intactas con copias carentes de los genes de la toxina col茅rica, conocidas como precursores de CTX蠁 (pre-CTX蠁).Como novedad se describe una diversidad al茅lica en pre-CTX蠁 que permite replantear el modelo explicativo de la relaci贸n evolutiva entre estas formas atoxig茅nicas y las variantes conocidas de CTX蠁 (Cl谩sico, El Tor y Calcuta), asumiendo que diferentes variantes precursoras han adquirido independientemente los genes de la toxina del c贸lera, para dar lugar a las variantes toxig茅nicas actuales. Luego la cepa CRC266 se modific贸 gen茅ticamente mediante la supresi贸n de los profagos CTX蠁 y pre-CTX蠁 del genoma y se obtuvieron las cepas TLP3, TLP11 y TLP13. Mediante remplazo al茅lico el gen hapA de TLP13, codificante de la proteasa soluble principal de Vibrio cholerae hemaglutinina/proteasa), se sustituy贸 por un alelo interrumpido por el gen celA de Clostridium thermocellum que codifica la endoglucanasa A. En consecuencia, las cepas obtenidas TLP131, TLP132 y TLP134 se distinguen de otros vibriones mediante un ensayo bioqu铆mico sencillo y r谩pido. Finalmente, a TLP132 se le suprimi贸 el gen mshA y se obtuvo TLP01, TLP03 y TLP05 que no expresan la fimbria conocida como hemaglutinina sensible a manosa (MSHA). Estas cepas colonizan el intestino del rat贸n Balb/c lactante sin provocar efecto letal y no se infectan con el fago VGJ蠁 debido a la ausencia del receptor MSHA, por lo cual no readquieren los genes que codifican la toxina col茅rica mediante la infecci贸n y lisogenizaci贸n con un fago h铆brido de CTX蠁 y VGJ蠁. Las cepas TLP01 y TLP05, no forman biopel铆culas sobre superficies abi贸ticas en cultivo de laboratorio, caracter铆stica que limitar铆a la supervivencia en el entorno natural y actuar铆a como elemento de contenci贸n del agente biol贸gico que constituya el ingrediente activo del candidato vacunal. Estas cepas resultaron inductoras de t铆tulos de anticuerpos con actividad bactericida en el conejo y la rata adultos, por lo que se concluye que las cepas TLP01 y TLP05 re煤nen las caracter铆sticas necesarias para transitar hacia la fase de desarrollo farmac茅utico para posterior evaluaci贸n precl铆nica y cl铆nica de seguridad e inmunogenicidad.

Tipo de tesis:Tesis de doctorado (Doctor en Ciencias de una Especialidad)
Palabras clave:Vibrio cholerae;C贸lera;Vacuna C贸lera;Vibrio cholerae serogrupo O139;Enfermedades Diarreicas
Materia:Disciplinas de las Ciencias Naturales > Disciplinas de las Ciencias Biol贸gicas > Biolog铆a
Enfermedades > Infecciones Bacterianas y Micosis > Infecciones Bacterianas
Especialidad doctoral:Otras
C贸digo ID:667
Depositado por:USUARIO NO VALIDO
Depositado en:09 Oct 2013 10:40
Ultima modificaci贸n:09 Oct 2013 11:13

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